Cytisine (shuningdek, baptitoksin deb ataladi) * Sophora alopecuroides * va * Thermopsis lanceolata * kabi dukkakli o'simliklardan olinadigan muhim alkaloiddir. U farmatsevtika, o'simliklarni himoya qilish va biologik vositalar kabi sohalarda keng qo'llaniladi; mahsulotning tozaligi to'g'ridan-to'g'ri uni qo'llash samaradorligi va me'yoriy hujjatlarga muvofiqligini aniqlaydi. Hozirgi vaqtda sitisin tozaligini tekshirish uchun sanoat usullari aniqlik, narx va qo'llash stsenariysi asosida uch turga bo'lingan: tezkor sifat sinovi, muntazam miqdoriy test va yuqori-aniqlikdagi miqdoriy aniqlash. Turli usullar turli xil namuna shakllariga mos keladi, masalan, xom ekstraktlar, sanoat tayyor mahsulotlar va mos yozuvlar standartlari. Quyida umumiy sanoat sinov tartib-qoidalari va asosiy fikrlar keltirilgan.
I. Yupqa{1}}Qatlam xromatografiyasi (TLC): Tez sifatli skrining, xom mahsulotlarni dastlabki sinovdan o'tkazish uchun mos
TLC sitizini ishlab chiqarish va ekstraksiya qilishda eng ko'p qo'llaniladigan tezkor skrining usuli hisoblanadi. Foydalanish oson va tejamkor{1}}, birinchi navbatda sitizin borligini aniqlash va aralashmalarni dastlabki baholash uchun xizmat qiladi. Bu xom ashyo ekstraktlari va xom mahsulotlarning dastlabki tozaligi skriningi uchun javob beradi, ammo aniq miqdoriy aniqlashga erisha olmaydi.
Asosiy operatsion protsedura: Birinchidan, Silika Gel G ni natriy gidroksid eritmasi bilan xamirga aralashtirish orqali gidroksidi silika jeli TLC plastinkasini tayyorlang; uni teng ravishda yoyib, uni 105 daraja haroratda bir soat davomida faollashtiring va foydalanish uchun sovushini kuting. Keyinchalik, sinov eritmalari va mos konsentratsiyalarda etalon eritmalarni tayyorlash uchun sinovdan o'tkaziladigan namunani va metanolda sitizine mos yozuvlar standartini eritib, keyin ularni TLC plastinkasiga qo'ying. Rivojlantiruvchi vosita sifatida benzol-aseton-etil asetat-metanol (4:2:1:1) dan iborat erituvchi tizimidan foydalaning va erituvchining old qismini oldindan belgilangan balandlikka ko'tarilishiga imkon bering. Nihoyat, plastinkani olib tashlang, uni havoda quriting-va vizualizatsiya uchun o'zgartirilgan Dragendorff reaktivi (kaliy vismut yodidi) bilan püskürtün.
Natijani talqin qilish: Vizualizatsiyadan so'ng, dog'larning holati va ravshanligini kuzating. Mos keluvchi namunada bir xil rangdagi va sezilarli begona dogʻlarsiz, Rf qiymati mos yozuvlar standartiga mos keladigan joyni koʻrsatadi (sanoat{1}}standart Rf qiymati taxminan 0,23). Chetdan dog'lar paydo bo'lishi, quyruq yoki Rf qiymatida sezilarli og'ish yuqori nopoklik tarkibini va tozalik standartlariga javob bermasligini ko'rsatadi. Bu usul sezilarli cheklovlarga ega: u faqat sifatli yoki yarim miqdoriy tahlilni taklif qiladi, aniq tozalik qiymatlarini aniq aniqlay olmaydi va yuqori nopoklik darajasiga ega bo'lgan namunalar uchun juda noto'g'ri natijalar beradi.
II. Yuqori-Suyuqlik Xromatografiyasi (HPLC): Sanoatda tayyor mahsulotlar uchun mos-standart miqdoriy usul
HPLC hozirda sanoat va tijorat xomashyosi sitizini{0}}ning tozaligini tekshirishning standart usuli hisoblanadi. U yuqori aniqlik va takror ishlab chiqarishni taklif etadi, bu esa aniq tozalik qiymatlarini aniq aniqlash imkonini beradi. U tozaligi 90% dan ortiq bo'lgan tozalangan mahsulotlar uchun mos keladi va korporativ sifat nazorati va uchinchi tomon{4}}bozor sinovi uchun asosiy usul bo'lib xizmat qiladi.
Standart sanoat xromatografik sharoitlari: C18 ustuni (250 mm × 4,6 mm, 5 mkm) ishlatiladi. Mobil faza 0,05 mol/L natriy dihidrogen fosfat eritmasi, metanol va ammoniy perklorat (15 ml: 85 ml: 0,5 g) dan iborat tizimdan iborat. Operatsion parametrlarga doimiy oqim tezligi 1,0 ml/min, aniqlash to'lqin uzunligi 305 nm, ustun harorati 25 daraja va inyeksiya hajmi 10 mkL kiradi. Bunday sharoitda sitizinning cho'qqisi yaxshi rezolyutsiya bilan nosimmetrik bo'lib, umumiy alkaloid aralashmalarini samarali ravishda ajratib turadi.
Amaliy sinov tartibi: Birinchidan, namunani oldindan tozalash{0}}qattiq namunalar namlik shovqinini bartaraf etish uchun 105 daraja haroratda 4 soat davomida doimiy og'irlikda quritilishi kerak; aniq tortishdan so'ng, namuna ultratovush orqali metanolda eritiladi, hajmgacha tayyorlanadi va 0,45 mkm organik membrana orqali filtrlanadi. Ikkinchidan, standart egri chiziqli preparat-tsitinning turli konsentratsiyali standart eritmalari tayyorlanadi va AOK qilinadi; standart egri chiziq y{6}}o‘qi bo‘yicha tepalik maydoni va x-o‘qidagi konsentratsiya bilan 0,04–1,2 mg/ml diapazonda yaxshi chiziqlilikni ko‘rsatuvchi chizilgan. Uchinchidan, namuna tahlili{11}}sinov eritmasi AOK qilinadi, eng yuqori maydoni qayd etiladi va yakuniy mahsulot tozaligini aniqlash uchun standart egri chiziq yordamida sitizin miqdori hisoblab chiqiladi.
Bu usul keng tarqalgan aralashmalarning aralashuvini samarali ravishda oldini oladi va sanoat ishlab chiqarish, sifat nazorati va partiyalar namunalarini olish uchun barcha talablarga javob beradigan minimal xatolik bilan natijalar beradi; u sanoat bo'ylab sitizina tayyor mahsulotlarning (tozaligi 98% dan katta yoki teng) tozaligini tekshirish uchun asos bo'lib xizmat qiladi.
III. Suyuqlik xromatografiyasi-Tandem massa spektrometriyasi (LC-MS/MS): Murakkab matritsalar uchun mos keladigan aniq iz tahlili
LC-MS/MS yuqori-aniqlikdagi aniqlash usuli boʻlib, asosan oʻsimlik xomashyosi, biologik preparatlar va oziq-ovqat matritsalari kabi murakkab namunalardagi sitizinning tozaligi va tarkibini aniqlash uchun ishlatiladi. U murakkab aralashmalar yoki iz miqdori analitni o'z ichiga olgan namunalar uchun standart HPLC dan ancha ustun bo'lgan ajratish va aniqlash imkoniyatlarini taklif etadi. U tez-tez ilmiy tadqiqotlarda, yuqori darajadagi mahsulotlarning qiymatini belgilashda va haqiqiyligini tekshirishda qo'llaniladi.
Asosiy ish jarayoni kislotali atsetonitril yordamida namunani ajratib olishni, soʻngra pigmentlar, polisakkaridlar va tegishli alkaloidlar kabi aralashuvchi moddalarni olib tashlash uchun qattiq{0}}fazali ekstraktsiya (SPE) ustunlari orqali tozalashni oʻz ichiga oladi. Aniqlash bir nechta reaktsiya monitoringi (MRM) rejimi yordamida amalga oshiriladi, bu sitisin va tarkibiy jihatdan o'xshash aralashmalar o'rtasida aniq farqlash imkonini beradi. Aniqlashning juda past chegarasi bilan u past sitizin tarkibiga ega bo'lgan namunalarning tozaligini aniq o'lchaydi, UV spektrofotometriyasi va titrlash usullari bilan bog'liq bo'lgan nopoklik aralashuviga sezgirlikni samarali ravishda bartaraf etadi. Biroq, uskunaning yuqori narxi va murakkab sinov ish jarayoni tufayli, bu usul zavod sozlamalarida muntazam partiyalarni sinovdan o'tkazish uchun mos emas.
IV. Differensial Skanerlash Kalorimetriyasi (DSC): Malumot materiallari uchun tozalikni belgilash va yuqori{1}}tozalikdagi mahsulotlarni tekshirish
DSC milliy sertifikatlangan ma'lumotnoma materiallariga va yuqori{0}}tozalik me'yorlariga (tsitizinin 99,5% dan yuqori yoki unga teng) tozalik qiymatlarini belgilashning asosiy usuli hisoblanadi. U issiqlik xossalaridagi farqlar asosida tozalikni aniqlaydi va sanoatdagi eng aniq aniqlash usullaridan biri boʻlgan yuqori-soʻnggi mos yozuvlar standartlari va tadqiqot-yuqori{5}}tozalikdagi sitisinning tozaligini tekshirish uchun keng qoʻllaniladi.
Bu usul murakkab namunani oldindan tozalashni talab qilmaydi; namunani eritish jarayonida issiqlik oqimining o'zgarishini kuzatish va natijalarni standart termogramma bilan solishtirish orqali ifloslik tarkibi va tozaligini aniq hisoblab chiqadi, bu ajoyib barqarorlik va aniqlikni ta'minlaydi. Sertifikatlangan ma'lumotnoma materiallari uchun milliy standartlarga muvofiq, mos tozalik parametrlarini chiqarishdan oldin sitizina mos yozuvlar materiallari HPLC va DSC usullari kombinatsiyasidan foydalangan holda tozalik qiymatini belgilashdan o'tishi kerak.
V. An'anaviy yordamchi aniqlash usullari (asta-sekin yo'q qilinadi; faqat ma'lumot uchun)
Ilgari sanoatda sitizinning tozaligini aniqlash uchun ultrabinafsha nurlarini yutish va kislota{0}}asos titrlash keng tarqalgan edi; hozirda ular faqat past navli xom mahsulotlarning tozaligini tezkor baholash uchun qo'llaniladi. UV spektrofotometriyasi tarkibni ma'lum to'lqin uzunliklarida absorbsiyaga asoslangan holda aniqlaydi, titrlash esa miqdoriy aniqlash uchun kislota{3}}asosni neytrallashiga asoslanadi. Har ikkala usul ham ishlatish uchun sodda va minimal uskunalar sarmoyasini talab qilsa-da, ular sezilarli kamchiliklarga ega: ular boshqa alkaloidlar, organik kislotalar va pigmentlar kabi aralashmalarning aralashuviga juda moyil bo'lib, o'lchashda jiddiy xatolarga olib keladi. Binobarin, ular faqat yuqori tozalik va past nopoklik darajasiga ega oddiy namunalar uchun javob beradi; joriy sanoat sifat nazorati va muvofiqlik standartlariga javob bera olmaganligi sababli, ular asosan HPLC tomonidan almashtirildi.
VI. Sinov uchun asosiy fikrlar (sanoat standarti amaliyotlari)
1. Namunadan oldingi ishlov berish: Sinovdan oldin barcha qattiq sitisin namunalari adsorbsiyalangan namlikni olib tashlash uchun doimiy vaznga erishilgunga qadar 105 daraja haroratda 4 soat davomida quritilishi kerak; bu namlikning faol moddani suyultirishiga va sun'iy ravishda past tozalik ko'rsatkichiga olib kelishiga yo'l qo'ymaydi. Standart mos yozuvlar ampulalari ochilgandan so'ng darhol ishlatilishi kerak va ularni qayta ishlatish uchun qayta muhrlab bo'lmaydi.
2. Nopoklikni nazorat qilish: oʻsimlik{1}}namunalari qoldiq polisakkaridlar, flavonoidlar va boshqa alkaloidlarni olib tashlash uchun yaxshilab tozalashni talab qiladi va shu bilan aralashmalarning xromatografik choʻqqilarga toʻsqinlik qilishi va sinov natijalarini buzishining oldini oladi.
3. Usul tanlash: TLC xom mahsulotlarni dastlabki saralash uchun ishlatiladi; HPLC sanoat tayyor mahsulot sifatini nazorat qilish uchun tanlangan; LC-MS/MS murakkab matritsali namunalar uchun tanlanadi; va HPLC va DSC kombinatsiyasi yuqori-tozalik standartlarini tahlil qilish uchun ishlatiladi.
Xulosa
Sitsinning tozaligini tekshirish uchun darajali sanoat tizimi yaratilgan. HPLC aniqligi, samaradorligi va iqtisodiy samaradorligi-bo‘yicha sanoat ishlab chiqarishi va tijorat savdosining asosiy standartiga aylandi. TLC tezkor dastlabki skrining uchun javob beradi, LC{3}}MS/MS va DSC mos ravishda murakkab namunalar uchun yuqori-aniqlikdagi sinov talablariga va yuqori-tozalik standartlariga javob beradi. Har bir usul o'ziga xos rol o'ynaydi va birgalikda sitizinin tozaligini tekshirish uchun keng qamrovli yechimni yaratadi.
Shaanxi Lv Ke Chun Yuan Biotechnology Co., Ltd
Bizning manzil
Huaxia Yue World, Weibin tumani, Baoji shahri, Shensi viloyati
Telefon raqami
+86-13571783771
E-pochta
